kelas mini q

Keceriaan in laboratorium(my friend)

aksi in lab

kubah masjid kabuh

imunologi elisa

Tugas Imunologi

ELISA(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)

Diskripsi teori

ELISA (singkatan bahasa Inggris: Enzyme-linked immunosorbent assay) atau 'penetapan kadar imunosorben taut-enzim' merupakan uji serologis yang umum digunakan di berbagai laboratorium imunologi. Uji ini memiliki beberapa keunggulan seperti teknik pengerjaan yang relatif sederhana, ekonomis, dan memiliki sensitivitas yang cukup tinggi. ELISA diperkenalkan pada tahun 1971 oleh Peter Perlmann dan Eva Engvall untuk menganalisis adanya interaksi antigen dengan antibodi di dalam suatu sampel dengan menggunakan enzim sebagai pelapor (reporter label).^[1]

Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) adalah suatu teknik biokimia yang terutama digunakan dalam bidang imunologi untuk mendeteksi kehadiran antibodi atau antigen dalam suatu sampel. ELISA telah digunakan sebagai alat diagnostik dalam bidang medis, patologi tumbuhan, dan juga berbagai bidang industri. Dalam pengertian sederhana, sejumlah antigen yang tidak dikenal ditempelkan pada suatu permukaan, kemudian antibodi spesifik dicucikan pada permukaan tersebut, sehingga akan berikatan dengan antigennya. Antibodi ini terikat dengan suatu enzim, dan pada tahap terakhir, ditambahkan substansi yang dapat diubah oleh enzim menjadi sinyal yang dapat dideteksi. Dalam ELISA fluoresensi, saat cahaya dengan panjang gelombang  tertentu disinarkan pada suatu sampel, kompleks antigen/antibodi akan berfluoresensi sehingga jumlah antigen pada sampel dapat disimpulkan berdasarkan besarnya fluoresensi.

Penggunaan ELISA melibatkan setidaknya satu antibodi dengan spesifitas untuk antigen tertentu. Sampel dengan jumlah antigen yang tidak diketahui diimobilisasi pada suatu permukaan solid (biasanya berupa lempeng mikrotiter polistirene), baik yang non-spesifik (melalui penyerapan pada permukaan) atau spesifik (melalui penangkapan oleh antibodi lain yang  spesifik untuk antigen yang sama, disebut ‘sandwich’ ELISA). Setelah antigen diimobilisasi, antibodi pendeteksi ditambahkan, membentuk kompleks dengan antigen. Antibodi pendeteksi dapat berikatan juga dengan enzim, atau dapat dideteksi  secara langsung oleh antibodi sekunder yang berikatan dengan enzim melalui biokonjugasi. Di antara tiap tahap, plate harus dicuci dengan larutan deterjen lembut untuk membuang kelebihan protein atau antibodi yang tidak terikat. Setelah tahap pencucian terakhir, dalam plate ditambahkan substrat enzimatik untuk memproduksi sinyal yang visibel, yang menunjukkan  kuantitas antigen dalam sampel. Teknik ELISA yang lama menggunakan substrat kromogenik, meskipun metode-metode terbaru mengembangkan substrat fluorogenik yang jauh lebih sensitif.

Teknik ELISA

-           Untuk menentukan kadar Ag atau Ab.

-           Indikator berupa enzim dilenketkan

-           pada Ag atau Ab.

-           Ada beberapa metode.

Prinsip Metode Elisa

Bila kita mau menditeksi antigen(Ag):

      Ag(serum) + AbE   → Ag- AbE komplek →cuci

      Inkubasi dengan substrat kromogenik(semula tak berwarna) → berwarna,bila

dihidrolisis oleh enzim → intensitas warna yang terjadi→diukur dengan fotometer/ spektrofotometer → kadar antigen.

      Hidrolisis oleh enzim berlangsung dalam waktu tertentu.

      Reaksi berhenti bila ditambahkan asam atau basa kuat.

      Reaksi harus berlangsung dalam keaadan optimal dimana :

§         kadar reaktan

§         temperatur

§         masa inkubasi yang telah ditentukan

secara eksperimental → setiap reagen dari pabrik ber beda → prosedur berbeda.

      Reaksi optimal sudah ditentukan secara eksperimental,dengan penetapan

§         kadar reaktan

§         temperatur

§         masa inkubasi

 setiap reagen dari fabrik berbeda → prosedur berbeda.

Metode Elisa

      Metode kompotitif

      Non kompotitif [Langsung]

      Indirek atau sandwich

v     Metode kompotitif

Þ          Umumnya untuk menentukan Ag.

Þ          Ab spesifik [dilekatkan pada partikel/sumur ] dicampur bersama sama Ag *

Þ          tambahkan serum [Ag] yang akan bersaing dengan Ag*untuk mengikatAb diatas → kompleks Ag*-Ab-Ag

v     Non kompotitif[ 􀃆 menentukan Ab atau Ag

v     Indirek/sandwich 􀃆 menentukan Ab dan Ag

·         Ag-Ab-AntiAb* 􀃆antibodi yang dicari

·         Abs –Ag –Ab*􀃆Ag yang dicari